P/C/I & Phenol/TE8 ― 手袋をして作ること ―

　　　Phenol（粒状）を注文しておく
　　　　※劇物のためstockを増やせないので、必ず作る前に注文するようにする

　＜ １日目 ＞
　　�@4℃保存してあるPhenolの瓶を60℃のwater bathで30〜60minかけてとかす
　　�A溶けたら空き瓶に目分量で半分に分ける
　　�B50mlチューブを用いて1M Tris(pH9.5)を200ml加える

（2M Tris(pH9.5) 100ml + A.C. D3W 100ml）
　　�Cしっかりキャップをしめて、ラップをかけてよく混ぜる
　　　　※白濁しているかどうか確認する
　　（塩濃度が高いと白濁しないので、その時は少しA.C. D3Wを加える）
　　�D使用禁マークをして4℃にてO/N

　＜ ２日目 ＞　　　　　− ドラフト内で作業するとよい −
　　�@上清をアスピレーターで吸引
　　　　（この時、5mlピペットを用いる。少し水層残ってても可）
　　 ↓ 　　↓
　　P/C/I 　Phenol/TE8
　　�A空き瓶にさらに二等分する 　�A0.1M Tris(pH8)を200ml加え
　　�B24:1 クロロホルムイソアミル 　　よく混ぜる
　　　をそれぞれの瓶に等量加える 　�B使用禁マークして4℃にてO/N
　　�C0.1M Tris(pH8)を200ml加え
　　　よく混ぜる
　　　　（2M Tris(pH8) 10ml + A.C. D3W 190ml）
　　�D使用禁マークして4℃にてO/N

　＜ ３日目 ＞　　　　　− ドラフト内で作業するとよい −
　　�@上清をアスピレーターで吸引
　　　　（5mlピペットを用いる。Phenol/TE8の方から吸えば、ピペットは１本で済む）
　　�A2M Tris(pH8) 500μl、2-メルカプトエタノール 200μl、0.5M EDTA 200μl、
　　　A.C. D3W 100mlを加えて混ぜる
　　�B使用禁マークして、4℃にてO/N

　＜ ４日目 ＞
　　�@２種類のpH試験紙で上層のpHを確認
　　　　　　　　　　　　　pH7.6以上ならO.K.
　　�AstockしてあったPhenol/TE8をP/C/Iに作り直す
　　　　　　　　　（今回作ったPhenol/TE8はそのまま）
　　�B4℃保存　（上層が多ければアスピレーターで吸引）

　★Phenol/TE8　→　P/C/Iにする方法
　　　Phenol/TE8（下層）と同量の24:1 クロロホルムイソアミルを加え、よく混ぜる。
　　　4℃でO/Nすれば使用可。　（pH check不要）